在 實時熒光定量PCR ( qPCR )實驗中，每一個細節(jié)都可能影響結(jié)果的準確性和可靠性。然而，在忙碌的實驗過程中，我們往往會忽略一些看似微不足道但至關(guān)重要的步驟。今天，就讓我們一起回顧那些常被cue到但又常被忽略的實驗細節(jié)吧！
圖片來源：GenStar官網(wǎng)
(1) 避免污染:?使用新的、無污染的槍頭和離心管，避免交叉污染。
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(2) Mg2?濃度: Mg2?濃度影響DNA聚合酶活性，需根據(jù)具體實驗調(diào)整?，F(xiàn)在商品化SYBR qPCR mix中的 Mg2?濃度都 是調(diào)整好的，除非有特殊需求才需要根據(jù)具體實驗調(diào)整Mg2?濃度。
(1) 設(shè)置陰性對照: 以PCR水替代模板設(shè)置陰性對照，排除模板污染造成的假陽性。另外，可以通過這篇文章了解一些qPCR實驗的名詞解釋《 qPCR實驗中的陽性對照，陰性對照，目標樣本，NTC和NRT的概念 》。
(1) 引物設(shè)計:?引物設(shè)計應避免互補序列，3’端避免連續(xù)三個以上的G或C?？梢酝ㄟ^這篇文章了解引物設(shè)計《 干貨 | NCBI/Oligo 7/primer 5 三種方法進行PCR引物設(shè)計教程 》。
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